白酒作為中國的國酒，和伏特加、威士忌、白蘭地、朗姆酒、杜松子酒并稱(chēng)為世界六大蒸餾酒[1][2]。其獨特的香味特征不僅是酒品質(zhì)的重要體現，更承載著(zhù)中國傳統文化內涵[3][4]。傳統白酒的生產(chǎn)加工過(guò)程以糧谷為原料，以酒曲為發(fā)酵劑，經(jīng)原料研磨、制曲、發(fā)酵、蒸餾和陳釀制成[5][6][7]。復雜的原料、特殊的工藝和多菌種共發(fā)酵等多種因素共同作用使得白酒的成分極其復雜。在白酒的組成中，水和乙醇約占98%左右，芳香物質(zhì)如酸、酯、醇和醛占不到2%，這些化合物基本由碳、氫、氧和其他雜原子（如氮和硫）組成[8][9][10]。揮發(fā)性有機化合物基本上決定了不同酒類(lèi)的品質(zhì)和香型[11]。因此，將白酒分為濃香、醬香、米香、清香和兼香等12種香型[12][13]。其中，清香型白酒具有清新純正的復合香氣，且口感醇厚綿甜、余味悠長(cháng)[14][15]。濃醬兼香白酒的釀造工藝將濃香型和醬香型白酒的釀造技術(shù)相結合，使酒體既有濃香型的濃郁窖香，又有醬香型的幽雅細膩[16]。

酯類(lèi)是形成白酒香氣的主要呈味物質(zhì)，其構成和配比是影響酒體風(fēng)格和品質(zhì)的關(guān)鍵因素[17]。乙酸乙酯和乳酸乙酯是清香型白酒的主體物質(zhì)，乙酸乙酯以其獨特的花果香味為白酒增加了清爽的口感，使白酒的整體香氣更加豐富；乳酸乙酯則賦予白酒獨特的窖香和槽香，口感綿軟柔和，且因其能提高乙酯與水的互溶性，增加了酒的醇厚感[18][19][20][21]。己酸乙酯是濃香和醬香型白酒的主要成分，為白酒提供了獨特的窖香和菠蘿果香，口感柔和圓潤，而且己酸乙酯還帶有輕微的刺激感，這種刺激感與甜味相互交織，使白酒更加綿甜醇厚[22][23]。己酸作為己酸乙酯的前體物質(zhì)，具有明顯的定味作用，賦予白酒獨特果味芳香，能有效降低白酒的辛辣味和苦味[24][25]。甲醇作為一種有毒物質(zhì)是白酒中重要的食品安全指標，如果其在白酒中含量超標，會(huì )對人體健康產(chǎn)生不良影響。目前，白酒中的風(fēng)味物質(zhì)檢測分別對應不同的國標檢測方法，不僅效率低，而且增加了檢測工作的復雜性。因此，對標準中的方法進(jìn)行優(yōu)化，建立一種簡(jiǎn)便、精確且高靈敏的方法，同時(shí)檢測清香型、濃香型或濃醬兼香型白酒中的甲醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸含量有重要的應用價(jià)值。

氣相色譜法（GC）由于其操作便捷、檢測分析快速、分離效果好、重復性強、靈敏度和分辨率較高等優(yōu)點(diǎn)，成為白酒中風(fēng)味物質(zhì)分析的首選方法[26]。張琴[27]等建立了同時(shí)檢測清香型白酒中甲醇、乙酸乙酯和乳酸乙酯的GC內標法，標準曲線(xiàn)相關(guān)系數R2均＞0.999，加標回收率分別為94.3%～100.4%、93.4%～100.2%、96.3%～99.8%，精確度較高；孟雄飛[28]等采用GC檢測乙酸乙酯、己酸乙酯等10種物質(zhì)，相關(guān)系數均在0.9990以上，加標回收率分別為94.3%～100.4%、93.4%～100.2%、96.3%～99.8%，具有較好的準確性和精密度。

本研究擬建立氣相色譜（GC）內標法，同時(shí)檢測清香型、濃香型或濃醬兼香型白酒中甲醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸的含量，并進(jìn)行方法確認驗證其可靠性，旨在優(yōu)化現有國標方法，提高檢測效率，為白酒品質(zhì)監控提供有力技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

酒樣：7個(gè)不同酒精度酒樣[1#（42.3%vol）、2#（50.0%vol）、3#（43.1%vol）、4#（52.0%vol）、5#（56.0%vol）、6#（43.2%vol）和7#（52.3%vol）]，市售白酒。

試劑及耗材：無(wú)水乙醇（色譜純，迪馬科技）；甲醇（GC，＞99.7%），中國計量科學(xué)研究院；乙酸乙酯（GC，＞99.7%），叔戊醇（GC，＞99.5%），上海阿拉丁生化科技股份有限公司；己酸乙酯（GC，＞99.5%），乙酸正戊酯（GC，＞99.5%），天津市光復科技發(fā)展有限公司；乳酸乙酯（GC，＞99.0%），上海麥克林生化科技有限公司；己酸（GC，＞99.5%），二乙基丁酸（GC，＞99.5%），天津市津科精細化工研究所。

儀器設備：GC-2010 Pro氣相色譜儀，日本島津公司；LA230s電子分析天平，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；Milipore超純水機，法國默克公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 溶液的配制

1.2.1.1 乙醇溶液的配制

無(wú)水乙醇：色譜純。

乙醇溶液（40%vol）：量取40 mL無(wú)水乙醇，用一級水定容至100 mL，充分混勻。

乙醇溶液（50%vol）：量取250 mL無(wú)水乙醇，用一級水定容至500 mL，充分混勻。

1.2.1.2 混合標準儲備溶液的配制

甲醇標準儲備液：稱(chēng)取0.5069 g甲醇至100 mL容量瓶中，用40%乙醇溶液定容至刻度，混勻。

乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯混合標準儲備液：分別稱(chēng)取2.5139 g乙酸乙酯、2.5021g乳酸乙酯、2.5055 g己酸乙酯標準物質(zhì)至100 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇（色譜純）定容至刻度，混勻。

己酸標準儲備液：稱(chēng)取1.0081 g己酸標準物質(zhì)至100 mL容量瓶中，用50%乙醇溶液定容至刻度，混勻。

1.2.1.3 混合內標溶液的配制

叔戊醇、乙酸正戊酯、二乙基丁酸混合內標溶液：分別準確稱(chēng)取10.0079 g、10.0077 g、10.0124 g叔戊醇、乙酸正戊酯、二乙基丁酸標準物質(zhì)至500 mL容量瓶中，用50%乙醇溶液定容至刻度，混勻。

1.2.1.4 混合標準工作溶液的配制

甲醇系列標準工作液：分別從甲醇標準儲備液中吸取了0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、5.0 mL，并分別注入25 mL容量瓶中，用40%乙醇溶液定容至刻度，依次得到了甲醇含量為101.076 mg/L、202.152 mg/L、404.303 mg/L、808.607 mg/L、1010.759 mg/L系列標準溶液。分別從每個(gè)甲醇系列標準溶液中吸取了10 mL，注入5個(gè)10 mL的容量瓶中，分別加入0.1 mL混合內標溶液，并進(jìn)行充分的混合以確保均勻性。

乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸混合標準工作液：首先從乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯的混合標準儲備液中，分別吸取0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL和1.0 mL，并分別注入5個(gè)10 mL的容量瓶中，同時(shí)，從己酸標準儲備液中，分別吸取了0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL和1.0 mL，分別加入到相應的容量瓶中，使用50%乙醇溶液定容，直至液面達到刻度線(xiàn)，分別加入0.1 mL混合內標溶液，充分混勻，配制成不同濃度的乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸的混合標準工作溶液。其中，乙酸乙酯的質(zhì)量濃度為251 mg/L、501 mg/L、1003 mg/L、1504 mg/L、2506 mg/L，乳酸乙酯的質(zhì)量濃度為248 mg/L、495 mg/L、991 mg/L、1486 mg/L、2477 mg/L，己酸乙酯的質(zhì)量濃度為249 mg/L、499 mg/L、997 mg/L、1496 mg/L、2493 mg/L系列混合標準工作溶液，己酸的質(zhì)量濃度為201 mg/L、401 mg/L、602 mg/L、802 mg/L、1003 mg/L系列混合標準工作溶液，遵循現配現用的原則，以確保試驗結果的準確性和可靠性。

1.2.2 樣品前處理

吸取試樣10.0 mL于容量瓶中，加入0.1 mL混合內標溶液，充分混勻，上機測定。

1.2.3 分析檢測

甲醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸的檢測采用氣相色譜法。

色譜條件：DB-WAX UI色譜柱（30.0 m×0.25 mm×0.50μm）；柱溫箱梯度升溫程序為初溫35 ℃，以5 ℃/min升至100 ℃，以10 ℃/min升至230 ℃，保持3 min；進(jìn)樣口溫度230 ℃；氫火焰離子化檢測器（hydrogen flame ionization detector，FID）溫度240 ℃；進(jìn)樣量0.5 μL；分流比30:1。

定性、定量分析：首先以色譜圖上甲醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸5種單標準品的色譜峰保留時(shí)間進(jìn)行化合物的定性分析，采用內標法進(jìn)行定量測定。甲醇選用叔戊醇作為內標物，乙酸乙酯、乳酸乙酯和己酸乙酯共同選用乙酸正戊酯作為內標，己酸使用二乙基丁酸作為內標。將已經(jīng)配制好的5種混合標準工作溶液置于設定的色譜條件下進(jìn)行測定，記錄其峰面積數據。以這種組分標準工作液的質(zhì)量濃度與對應內標質(zhì)量濃度的比值為橫坐標（記作X軸），以其峰面積與對應內標峰面積的比值為縱坐標（記作Y軸），繪制標準工作曲線(xiàn)，并通過(guò)線(xiàn)性回歸分析得到相應的回歸方程，計算樣品中各組分的含量。

1.2.4 方法確認

(1) 標準曲線(xiàn)、檢出限及定量限

遵循1.2.1.4中所述步驟，配制5種組分的混合標準工作溶液，按照規定色譜條件進(jìn)行測定，以該5種組分標準工作液的質(zhì)量濃度與對應內標質(zhì)量濃度的比值為橫坐標（記作X軸），以其峰面積與對應內標峰面積的比值為縱坐標（記作Y軸），繪制標準工作曲線(xiàn)。采用信噪比法S/N=3和S/N=10，計算方法中5種組分的檢出限（limit of detection，LOD）和定量限（limit of quantitation，LOQ）。

(2)精密度及加標回收率試驗

精密度試驗：首先選取白酒酒樣1# ，遵循1.2.2的方法對樣品進(jìn)行前處理，然后用1.3.3的色譜條件對樣品進(jìn)行6次平行的測定，計算各組分測定結果的相對標準偏差（relative standarddeviation，RSD）。

加標回收率試驗：選取編號為2#的白酒酒樣進(jìn)行加標操作。首先，測定2#白酒酒樣的本底值，在該酒樣中分別加入不同質(zhì)量濃度的甲醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸標準溶液，各化合物選擇低、中、高三個(gè)不同的濃度水平，分別為甲醇（0.049、0.298、0.497 g/L）、乙酸乙酯（0.100、0.607、0.907 g/L）、乳酸乙酯（0.099、0.599、0.897 g/L）、己酸乙酯（0.100、0.603、0.902 g/L）、己酸（0.100、0.300、0.501 g/L），并在每個(gè)濃度水平下進(jìn)行6次平行測定，遵循1.3.2的方法對樣品進(jìn)行前處理，使用1.2.3的色譜條件進(jìn)行測定，根據試樣本底值、加標后測量濃度、實(shí)際加標量計算得出方法回收率。

1.2.5 數據處理

利用LabSolution工作站查看色譜圖、繪制標準曲線(xiàn)，利用Excel 2021軟件進(jìn)行數據處理。

2 結果與分析

2.1 定性分析

根據定性分析結果繪制5種標準物質(zhì)和3種內標物質(zhì)的混合溶液氣相色譜圖（見(jiàn)圖1）。從圖1可知，甲醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯、己酸及其對應的3種內標物質(zhì)在色譜圖中實(shí)現了完全分離，且峰形尖銳，表明分離效果良好。更重要的是，整個(gè)檢測過(guò)程在30 min內完成，體現了方法的高效性。

2.2 方法確認

2.2.1標準曲線(xiàn)、檢出限及定量限

對混合標準工作溶液進(jìn)行測定，并繪制標準工作曲線(xiàn)，分析得出各組分回歸方程、相關(guān)系數及線(xiàn)性范圍，結果見(jiàn)表1。在各自的質(zhì)量濃度范圍內，各組分均呈現出良好的線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數R2均>0.999，表明該方法具有較高的精確性和可靠性。甲醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸檢出限分別為3.04 mg/L、1.46 mg/L、1.36 mg/L、0.92 mg/L、0.67 mg/L，定量限分別為10.13 mg/L、4.88 mg/L、4.53 mg/L、3.08 mg/L、2.23 mg/L，說(shuō)明該方法具有較好的檢測能力和靈敏度。

2.2.2 精密度試驗

酒樣1#中各組分的含量和相對標準偏差結果見(jiàn)表2。甲醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸組分含量測定結果的RSD分別為0.57%、0.33%、0.59%、0.12%、2.04%，表明該方法精密度良好。

2.2.3 加標回收率試驗

酒樣2#中各組分的加標回收率、平均加標回收率及RSD，結果見(jiàn)表3。甲醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸的平均加標回收率分別為為97.6%~102.8%、102.3%~104.0%、96.0%~99.9%、98.2%~102.4%、91.7%~94.2%，RSD分別為1.10%~1.69%、0.60%~1.22%、0.98%~1.91%，0.50%~1.50%，1.17%~2.88%，均<3%，滿(mǎn)足分析要求，表明本方法回收率較高、穩定性較好。

2.2.4 實(shí)際樣品的測定

選取3#-7#不同酒精度的清香型和濃醬兼香型白酒樣品，按照方法1.23.2進(jìn)行樣品前處理，1.2.3色譜條件分析檢測，檢測結果按照GB 2757—2012、GB/T 10781.2—2022 、GB/T 10781.8—2021進(jìn)行判定，檢測及判定結果見(jiàn)表4、5。結果表明檢測方法能夠較好地滿(mǎn)足企業(yè)實(shí)際樣品檢測的需求。

3 結論

本方法能夠將5種組分有效分離，峰形尖銳，分析時(shí)間約30 min。在各自的質(zhì)量濃度范圍呈現線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數R2均>0.999；精密度試驗結果的RSD分別為0.57%、0.33%、0.59%、0.12%、2.04%；甲醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸的LOD分別為3.04 mg/L、1.46 mg/L、1.36 mg/L、0.92 mg/L、0.67 mg/L，LOQ分別為10.13 mg/L、4.88 mg/L、4.53 mg/L、3.08 mg/L、2.23 mg/L；加標回收率分別為97.6%~102.8%、102.3%~104.0%、96.0%~99.9%、98.2%~102.4%、91.7%~94.2%。實(shí)際樣品測定能夠滿(mǎn)足國標相應的檢測要求。

本試驗建立了一種可以同時(shí)測定清香型、濃香型或濃醬兼香型白酒中甲醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸含量的氣相色譜檢測方法，方法分離效果好，分析時(shí)間短，相較于國標方法檢測效率有明顯提高，檢測結果準確可靠，可用于清香型、濃香型和濃醬兼香型白酒中甲醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯和己酸的分析檢測。